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克隆形成率
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-03 | 10132 次浏覽 | 分享到:


實驗簡介
        細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞後貼壁的細胞成活並形成克隆的數量。貼壁後的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必爲貼壁和有增殖活力的細胞。克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。




服務流程 
        1 取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化並吹打成單個細胞,並把細胞懸浮在完全培養基中備用;
        2 将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每孔50100200個細胞的梯度密度分別接種含2mL 37℃預溫培養液的六孔板中,並輕輕轉動,使細胞分散均勻。置375% CO2及饱和湿度的細胞培養箱中培养23周;
        3 经常观察,当培养板中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞1mL固定15分鍾。然後去固定液,加適量GIMSA應用染色液染1030分鍾,然後用流水緩慢洗去染色液,空氣幹燥;
        4 将平皿倒置白色纸片上,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10個細胞的克隆數。最後計算克隆形成率。
克隆形成率 =(克隆數/接種細胞數)×100% 


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