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 circRNA服務

circRNA服務?
circRNA熒光素酶報告檢測
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-03 | 12506 次浏覽 | 分享到:


Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)爲底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統。熒光素和熒光素酶這一生物發光體系,可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。

本實驗適用于驗證circRNA sponge功能,當miRNAscircRNA吸附,理論上細胞內miRNA的總量不會産生變化,因此無法通過qRT-PCR檢測來判斷miRNA是否吸附。我公司利用psiCHECK2質粒,對miRNAscircRNA的關系作出准確判斷,其原理簡述如下:

1)構建一個將circRNA特定片段插入到熒光素酶報告基因質粒psiCHECK2中;

2)將要檢測的miRNA與報告基因質粒共转染293細胞或其它相關的細胞系。如果此miRNA能够與circRNA结合,则荧光素酶基因就会下调,荧光素酶的表达量與miRNA-circRNA的作用強度成反比;

3) 如果将circRNA序列具有 sponge功能的片段进行突变,则質粒與miRNA共轉染到細胞中,熒光素酶的表達量將不再受miRNA的影響。


技術優勢:


(1)采用psiCHECK2質粒Luciferase双荧光報告系统,可以获得宽泛的线性定量范围與极高的灵敏度;
2)采用瞬時轉染技术,操作简便、快速,周期短,适用于绝大多数细胞类型。


實驗提供 
1)克隆含有circRNA或结合位点序列的報告質粒;


2詳細實驗結果報告與数据分析