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 自主産品

自主産品?
RNase R
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2018-03-29 | 19249 次浏覽 | 分享到:



Ribonuclease R (RNase R)

貨號

試劑

規格

保存條件

R0301

RNase R (20U/μL)

500 U

-20

10X Reaction Buffer

1 mL


RNase R (Ribonuclease R)是一种来源于大肠杆菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶,可从3’-5’方向將RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化几乎所有的線性RNA分子,但不易消化環形RNA、套索结构或3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子。RNase R常用于基因表达和可变剪切研究,可消化線性RNA以使環形RNA (circRNAs)或套索结构RNA (lariat RNA)得到富集。





産品組分:

Storage Buffer

50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1%

Triton? X-100, 50% Glycerol

10X Reaction Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2


單位定義
標准反應體系下,于 37℃,10 min 1 μg poly(A)转化成酸溶核苷酸所需的酶量定義为一个活力單位(U)


反應體系

20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。

注:1RNase R 0.1-0.5 mM Mg2+存在時活性最高,反應中 EDTA 可能降低 RNase R 活性,此時可額外添加 MgCl2 使 Mg2+ 濃度最高達到 0.5 mM2孵育後可于 70℃,10 min 使酶失活,再進行下遊實驗如逆轉錄;也可不滅活,直接純化後進行下遊實驗。


質量
控制:
SDS-PAGE 檢測純度>99%Total RNA RNase R 消化後進行 RT-qPCR 檢測,線性 RNA 豐度明顯降低, 環形RNA 豐度基本不變。



參考文獻:
1. Cheng ZF, Deutscher MP. J. Biol. Chem. 2002; 277:21624–21629.
2.Suzuki H et al.. Nucleic Acids Res. 2006; 34(8), e63.
3.Vincent HA, Deutscher MP. J Biol Chem. 2006 Oct 6; 281(40):2976975.

性能比較-
RNA電泳檢


        將10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之後直接進行電泳检測,结果顯示RNase R+28/18/5S條帶變淡不可見表明RNase Rtotal RNA的消化作用。吉賽和公司e或公司a的RNase Rtotal RNA化效果相當。


     性能比較-RT-qPCR检測
 




10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之後進行RT-qPCR实验,结果顯示RNase R+β-actinFGFR2的豐度都明顯降低表明RNase R消化線性RNA。吉賽和公司e的RNase R線性RNA消化效果相當,優于公司a的RNase R




10U RNase R加入2.5 μg total RNA37孵育30 min,之後進行RT-qPCR实验,结果顯示RNase R+ 組中hsa_circFOXO3_002hsa_circMTO1_001的豐度基本不變,表明環形RNA耐受RNase R的消化。吉賽和公司e或公司a的RNase R效果相當。

注:數據計算以RNase R+吉賽”組为對照,设定其相對豐度值为1



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